由于药物杂质需要严格控制以确保安全性，因此开发高度可靠的分析方法至关重要。在方法开发过程中，随着分析方法的变化，药物及其杂质的保留时间也发生着变化，如何能准确快速的对其进行追踪，很大程度上影响着方法开发的效率。利用LabSolutions MD方法开发软件高效的自动峰追踪功能，可通过包括质谱信息在内的多种条件快速准确定位目标峰，无需依赖直觉或者经验，并节省大量的时间。

分析示例

孟鲁司特及其杂质的分析方法开发

目标1：构建“设计空间”可视化评估不同梯度参数对孟鲁司特每种杂质的分离度的影响。

目标2：准确跟踪多个具有相似紫外光谱的杂质。

目标3：寻找具有出色分离度的同时又能缩短分析时间的方法。
 

一、分析条件

通过最终梯度浓度和梯度程序的斜率，研究孟鲁司特及其杂质的分离度变化。

最终梯度浓度:75%，80%，85% (共3种，增量5%)

梯度程序斜率:8分钟，13分钟，18分钟 (共3种，增量5分钟)

二、使用质谱检测器进行高效峰跟踪

由于6种杂质之间的紫外光谱具有很高的相似度，基于紫外光谱的峰跟踪将会很困难。如图1所示，Imp1和Imp6(相似性>0.99) 、Imp2和lmp4(相似性>0.9)以及Imp3和Imp5 (相似性>0.999)。LabSolutions MD 可使用LCMS-2050单四级杆质谱检测器实现基于m/z的峰跟踪，能够准确识别具有相似紫外光谱的杂质 (图2)

图2显示了在最终梯度浓度为80%和梯度斜率分别为18分钟和8分钟下获得的LC色谱图，通过m/z成功追踪到保留时间发生变化的对应杂质(lmp1至6)。

三、利用设计空间进行可视化评估

为了确定最佳分析条件，当最终浓度和梯度斜率发生变化时，通过设计空间将分离度可视化。图3显示了孟鲁司特和Imp1的分离度设计空间。红色区域表示较高的分离度，蓝色区域表示较低的分离度。该设计空间可直观的显示:本示例中较低的最终浓度和较长的梯度斜率可以实现更好的分离。

更重要的是，LabSolutions MD 可以通过叠加设计空间来简化对最佳分析条件的搜索。例如，希望方法同时符合多个响应目标:1.孟鲁司特和Imp1分离度>2.6，2.每种化合物的最小分离度>1.2，3.最后洗脱峰 (mp6) 的RT<17分钟。图4中黑色阴影区域是满定所有目标的区域。分析时间最短的最佳点位于点A 附近，该点以红色圈出。

如此，通过叠加分离度和最后一个峰洗脱时间的设计空间，可以轻松找到提供同时满足足够分离度和更短分析时间的最佳条件。另外，通过设计空间可以轻松了解LC参数是如何影响分离度和保留时间等响应结果的，这意味着可以在不依赖方法开发人员经验的情况下找到可靠的方法。

四、最佳条件下的色谱图

在最佳条件下 (A点) 获得的色谱图如图5所示。该条件下，孟鲁司特和Imp1的分离度为2.7，每种杂质的最小分离度为1.4(Imp3)，最后洗脱峰的保留时间小于17 min，成功满足目标。

总结

使用 LabSolutions MD和 LCMS2050对药物杂质进行高效方法开发。基于m/z的峰跟踪即使在相似的紫外光谱下也能准确识别每种杂质。

LabSolutions MD可视化的设计空间叠加功能，无论用户经验如何，都可以轻松开发更有效(分离度) 和更快速 (分析时间) 的分析方法。