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糖链结构分析

2020-11-03

老鼠单克隆抗体的糖链结构分析

由于在蛋白翻译后多种酶活动,在糖蛋白比如抗体药物里的糖链是变化的,糖链结构的多变性和非一致性是一个无法回避的问题。
尽管如此,指导方针还是要求了最大可能限度的糖链结构分析。例如,由于岩藻糖(糖链的一种分成)的存在与依赖抗体的细胞毒性(ADCC)之间关系已经被报,为了研发而分析抗体药物里糖链的重要性将会在未来继续提升。

这是一个分析商业化小鼠单抗糖链的例子。
 

检测、研究流程

  1. 根据染色胶上的抗体,切割SDS-PAGE条带。
  2. 用PNGaseF进行胶内酶解。
  3. 纯化糖链并用BlotGlyco kit (Sumitomo Bakelite) 氨基吡啶标记。
  4. Prominence nano/AccuSpot/AXIMA Resonance进行MSn分析

 

结果

表1显示了检测到的离子m/z值和Prominence nano的洗脱时间。m/z值用平均质量数来表示(整数值)。检测到七个离子:m/z 1418、 m/z 1580、 m/z 1564、 m/z 1726、 m/z 1888、 m/z 2047、和m/z 2209。

表1. 糖链衍生离子和检测时间


Fig.1 显示了m/z 1580和m/z 1726的MS/MS和MS/MS/MS图谱。预期的糖链结构显示在图里。软件可以轻松地确定岩藻糖的存在,牵涉到ADCC。

除了Fig.1的糖链,其他糖链的存在也通过结构确认,比如G0-F, G0, G1'-G1', G2, G0+S, 和 G2+S。

因为这个分析使用了从凝胶上切割下来的抗体作为起始物,需用Prominence nano/AccuSpot进行痕量分析。

Fig. 1 MS/MS 和 MS/MS/MS 谱图预测糖链结构


AXIMA Resonance MALDI-TOF MS

• Prominence nano LC 实现高灵敏度的糖链解析。独特的逆流控制系统加强了分离重现性,专门的 Nano-Assist软件简化了自动化及参数设定。
• AccuSpot 自动添加基质并将Prominence nano LC分离的糖链定位至MALDI靶板。
• Prominence nano分离纯化糖链混合物可减少由杂质引起的离子抑制。
• 分析软件提供了强大的糖链结构解析支持。